杨金荣 1,2 , 曾科 1,2 , 李军 1 , 牛挺 1,2
  • 四川大学(成都,610041) 1 华西医院血液科及血液学研究室,2生物治疗国家重点实验室;
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目的  构建含小鼠血管内皮生长因子(mVEGF)的重组慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后感染NS-1小鼠骨髓瘤细胞株,以便进一步探索VEGF在骨髓瘤病理生理机制中的作用。 方法  聚合酶链反应法扩增mVEGF基因,克隆入含嘌呤霉素抗性的pCDH慢病毒表达载体,构建出表达mVEGF的慢病毒表达载体pCDH-mVEGF;采用磷酸钙法将慢病毒系统三质粒pCDH-mVEGF、psPAX2、pMD2.G共转染293FT细胞包装病毒,分别收集转染后48 h和72 h病毒上清并感染靶细胞NS-1,初次感染72 h后开始采用嘌呤霉素筛选稳定株,筛选2周后采用ELISA法检测稳定株细胞培养上清中mVEGF的表达,建立出稳定高表达mVEGF的NS-1小鼠骨髓瘤细胞株。 结果  成功构建重组慢病毒表达质粒pCDH-mVEGF,并包装成慢病毒颗粒,感染NS-1细胞株后获得靶基因的稳定高表达。 结论  成功构建出含mVEGF的慢病毒表达载体pCDH-mVEGF,慢病毒系统能有效介导目的基因在NS-1小鼠骨髓瘤细胞株中稳定表达,病毒包装成功并能有效感染NS-1细胞,为进一步探索VEGF在骨髓瘤病理生理机制中的作用奠定了基础。

引用本文: 杨金荣,曾科,李军,牛挺. 小鼠血管内皮生长因子慢病毒载体的构建及其在NS-1小鼠骨髓瘤细胞株中的表达. 华西医学, 2013, 28(7): 998-1002. doi: 10.7507/1002-0179.20130310 复制

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