• 1. 四川大学华西医院公共实验技术中心(成都 610041);
  • 2. 四川大学华西医院实验医学科(成都 610041);
  • 3. 西安交通大学第一附属医院麻醉手术部(西安  710000);
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目的鉴于肺部疾病的高发病率以及活体动物实验在揭示生物现象方面的优势,建立一套利用共聚焦显微镜进行小鼠肺部活体原位成像的方法。方法将 10 只 BALB/c 雄性小鼠随机分为 A、B 两组,每组各 5 只。利用自制的稳定装置,控制小鼠局部肺组织的运动以获取稳定的观察面,然后用激光共聚焦显微镜进行视频拍摄(5 min)。拍摄过程中,A 组小鼠经尾静脉注射异硫氰酸荧光素-葡聚糖,B 组注射绿色荧光蛋白-血小板(经 tie2-cre&rosa26-tomato-EGFP 转基因 black C57 雄性小鼠的血液提取),A 组用于观察肺部灌注情况以及该方法对肺组织的损伤情况,B 组用于观察血小板运动的情况。结果通过该套方法获得了肺组织结构清晰、稳定的图像,随时间推移,5 只小鼠第 0、30、60、120、180 和 300 秒这 6 个时间点肺泡面积的均值依次为(1 603±181)、(1 588±183)、(1 528±363)、(1 506±353)、(1 437±369)、(1 549±307) μm2,肺泡大小未随时间变化(P>0.05);视频画面流畅,血小板的快速运动均被记录而且颗粒清晰、无拖尾;观察结束后,苏木精-伊红染色显示肺组织无明显损伤。结论该套方法可用于小鼠肺部活体状态下微循环系统的观察和研究,为其他肺部疾病在活体状态下的研究提供了方法学基础。

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