• 1. 四川大学华西医院动物实验中心(成都 610041);
  • 2. 黑龙江八一农垦大学生命学院(黑龙江大庆  163319);
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目的构建金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白 A(fibronectin binding protein A,FnBPA)r10-11 截短体融合蛋白的原核表达菌株并研究其免疫原性。 方法采用重组聚合酶链反应(ploymerase chain reaction,PCR)技术从金黄色葡萄球菌 Newman 株全基因组序列中进行 PCR 扩增,对扩增产物进行纯化,连接 T 载体后转入大肠杆菌 DH5α 中进行克隆,提取重组后的质粒进行双酶切鉴定,并回收目的片段连接到 pET-32a 质粒中,转化到大肠杆菌 BL21(DE3)中进行原核表达,采用 HIS 蛋白纯化柱纯化截短蛋白 FnBPAr10-11,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE )鉴定,纯化后的 FnBPAr10-11 用于免疫小鼠[分为无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)组、FnBPA 组、FnBPAr10-11 组],检测小鼠血清免疫球蛋白 G(immunoglobulin G,IgG)水平、细胞因子水平、免疫保护率。 结果SDS-PAGE 分析显示,表达后的蛋白相对分子质量约为 33.1×103。FnBPAr10-11 组与 FnBPA 组 IgG 抗体效价达 1∶128 000,与 PBS 组比较差异有统计学意义(P<0.05)。FnBPAr10-11 组的细胞因子水平与 FnBPA 组比较差异无统计学意义(P>0.05),与 PBS 组比较差异有统计学意义(P<0.01)。攻毒试验中 FnBPAr10-11 组的免疫保护作用在 50% 以上。 结论成功构建了金黄色葡萄球菌 FnBPAr10-11 截短体融合蛋白的原核表达菌株,该截短蛋白免疫原性良好。

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