• 1. 四川大学华西医院公共实验技术中心(成都 610041);
  • 2. 四川大学华西医院呼吸与危重症医学科(成都 610041);
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目的 构建人结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)基因启动子荧光素酶报告基因的真核表达载体。方法 设计特异性引物,通过聚合酶链反应实验扩增人基因组中 CTGF 启动子区域的 DNA(-835/+214),通过分子克隆方式将人 CTGF 启动子的序列插入到 pGL3.0-Basic 载体,通过单克隆菌落聚合酶链反应、质粒双酶切鉴定、测序等方法对其进行阳性质粒的筛选和鉴定;然后使用转染试剂 Lipofectamine 3000 将 pGL3.0-Basic-CTGF 分别转染于人胚肾细胞 293T、人气道上皮细胞 HBE 和人肺泡上皮细胞 A549,通过测定荧光素酶活性鉴定其功能。结果 序列比对结果为 99.50%,提示 pGL3.0-Basic-CTGF 载体构建成功。将 pGL3.0-Basic-CTGF 分别转染于 293T、HBE 和 A549 细胞 48 h 后检测,在 293T、HBE 和 A549 细胞中均有启动子活性,分别为 2.416、0.027、0.121(P<0.01);而且在 A549 细胞中荧光素酶的活性明显高于 HBE 细胞组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 人 pGL3.0-Basic-CTGF 荧光素酶系统构建成功,且在气道上皮细胞 HBE 和肺泡上皮细胞 A549 中均有启动子活性,可为后续转录调控研究提供工具。

引用本文: 朱国念, 钟礼春, 吴思思, 田鑫, 汤小菊. 人 CTGF 基因启动子荧光素酶报告基因的构建及活性鉴定. 华西医学, 2020, 35(1): 22-27. doi: 10.7507/1002-0179.201909159 复制

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